第423章 成功

類別:都市言情 作者:小啊小提莫 本章:第423章 成功

    78_78905多順反子能和核糖體亞基上的16srrna的端富含嘧啶核酸的區域配對結合,有助於帶有甲甲硫氨酸的起始rna識別rna上的起始密碼(aug),使鏈合成從此開始。這段順序是1974年由j夏因和l達爾加諾發現的,所以稱為sd順序,也稱核糖體結合部位。原核生物rna的編碼區一般編碼幾種功能上相關聯的蛋白質,兩種蛋白質的編碼區之間常有一段不翻譯的順序,叫做間隔區。

    有的噬菌體rna中個相鄰的順反子共用一段相同的編碼順序,例如,噬菌體rna中的溶菌蛋白編碼區共5個核酸中有189個核酸是由相鄰兩個蛋白質共用的。原核rna與真核rna一樣使用同一套三聯體密碼子(真核生物線粒體rna有例外)。原核生物合成氨基酸的操縱子rna的5端前導順序上有一段順序稱作弱化子。弱化子具有兩種可以互變的構象,其中一種構象是轉錄終止的信號,能使轉錄中止(或衰減)。衰減調節是原核生物合成氨基酸的調控方式之一。

    真核生物rna(細胞質中的)一般由5端帽子結構、5端不翻譯區、翻譯區(編碼區多順反子

    多順反子)、端不翻譯區和端聚腺酸尾巴構成。分子中除g構成帽子外,常含有其他修飾核酸,如a等。5端帽子結構通常有種類型,即:g(5)ppp(5)n;g(5)ppp(5)n和g(5)ppp(5)n。圖1b[真核生物rna結構示意圖b5端帽子結構式,表示堿基,表示堿基是帽子的化學結構,n右邊的代表核糖位羥基的甲基化。真核細胞線粒體中的rna無帽子結構。一般認為帽子的功能與翻譯的啟動有關。許多真核生物rna(如珠蛋白rna)除去帽子後翻譯效率大大降低。5端不翻譯區。也叫前導順序。不同的真核rna的前導順序長度不同,有的隻有10個核酸,有的則有00個核酸。與原核rna相似。真核rna5端不翻譯區中常有一段順序與核糖體亞基上的18srrna的端的一段順序互補並結合,這種結合與真核rna的翻譯啟動有關。

    翻譯區(編碼區)使用的密碼子除線粒體(如人、牛和酵母線粒體)外與原核生物rna是一樣的。真核生物rna的起始密碼子都是aug。真核和原核生物rna使用的密碼子也都有‘簡並現象‘。即幾種不同的密碼子翻譯出同一種氨基酸,但不同的rna中簡並密碼子的利用率是不同的,真核與原核生物之間的差別就更大。rna的終止密碼子有個(uag、uga和uaa),其功能是停止翻譯,一般隻用一個終止密碼子就能使翻譯停止。有的rna有個連續的終止密碼子(見)。

    端不翻譯區的長短在不同的rna上有所不同,β珠蛋白rna隻有9個核酸,而卵白蛋白rna則有67個核酸。真核生物rna端不翻譯區常有aauaa(a)或auuua(a)等順序,它們和識別多聚a聚合及裝配多聚a尾巴有關。除個別組蛋白rna外。真核生物rna端均有多聚a尾巴端多聚a尾巴的長度隨來源不同而不同,且隨rna的老化而變短,通常有0~00個a多聚a與rna穩定性及rna從細胞核轉到細胞漿中有關。

    多順反子描述的是一個新型的表達係統,用以從一個單一多順反子構建體中產生目的多基因產物。尤其是,該表達係統包含一個多順反子載體,能夠在真核宿主細胞中表達功能抗體,其中載體在5′-′方向上至少包含下麵的可操作連接的元件:在真核細胞可操作的啟動子;編碼至少抗體輕鏈可變區的dna序列;內部核糖體進入位點(ires);以及至少一個編碼抗體重鏈的dna序列。也公開了包含多順反子表達載體的哺乳動物細胞,和一種在用多順反子表達載體轉染的哺乳動物細胞中產生功能抗體的方法。

    而最後一步,則是在麵找到報告基因。

    報告基因是一種編碼可被檢測的蛋白質或的基因,也就是。是一個其表達產物非常容易被鑒定的基因。把它的編碼序列和基因表達調節序列相融合形成嵌合基因,或與其它目的基因相融合,在調控序列控製下進行表達。從而利用它的表達產物來標定目的基因的表達調控,篩選得到轉化體。

    在植物基因工程研究領域,已使用的報告基因有以下幾種:胭脂堿合成基因(ns)、章魚堿合成基因(s)、新黴素磷酸轉移基因(np)、氯黴素乙轉移基因(a)、慶大黴素轉移基因、葡萄糖基因、熒光基因等。ns、s這兩個基因是致瘤土壤農杆菌(s)的i質粒特有的,對i質粒進行改造,用相應的致瘤農杆菌轉化植物體時,如果外源基因轉入植物體中,則這兩種報告基因在植物根莖葉中均能表達,不受發育調控,檢測時直接用轉化體提取液進行紙電泳。染色後在紫外光下觀察熒光即可。np、a及慶大黴素轉移基因,均為抗生素篩選基因。相關的可以對底物進行修飾(磷酸化、乙化等),從而使這些抗生素失去對植物生長的抑製作用。使得含有這些抗性基因的轉化體能在含這些抗生素的篩選培養基上正常生長,也可以用轉化體提取液體,外用同位素標記,放射自顯影篩選轉化體。常用的一種報告基因是β-d-葡萄糖基因,該催化底物形成β-d-葡萄糖酸。它在植物體中幾乎無背景,組織化學檢測很穩定,可用分光光譜、熒光等進行檢測。熒光基因(lu)是1985年從北美熒火蟲和叩頭蟲a文庫中克隆出來的。該在有ap、g+、和熒光素存在下發出熒光,這樣就可用轉基因植物整株或部分直接用-光片或專門儀器進行檢測。

    在動物基因表達調控的研究中。報告基因也被廣泛應用。常用的有氯黴素乙轉移基因(a)、β-半乳糖基因(laz)、二氫葉酸還原基因、熒光基因等。a基因作為報告基因,檢測時可通過放射自顯影觀察。熒光基因作為報告基因,具有檢測速度快、靈敏度比a基因高0~1000倍、費用低、不需使用放射性同位素等優點,得到了廣泛的采用。


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